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    C57BL/6小鼠T細胞淋巴瘤細胞;RMA培養的具體無菌技術要點

    更新時間:2021-06-23點擊次數:1894

    C57BL/6小鼠T細胞淋巴瘤細胞;RMA培養的具體無菌技術要點:

    1. 實驗開始前,無菌室和無菌操作臺需要紫外光照射30到60分鐘*滅菌,用70%ethanol擦拭無菌操作臺面,并且打開無菌操作臺風扇運行10分鐘之后,才可以進行實驗操作。每次操作只能處理一株細胞株,即使培養基*相同也不可共用培養基,以避免細胞間污染或失誤混淆。實驗完成后,請將實驗物品拿出工作臺,用70%ethanol再次擦拭無菌操作臺面。操作間隔應該讓無菌操作臺運轉10分鐘到15分鐘后,才能進行下一個細胞株的操作。
    2. 無菌操作工作的區域應保持清潔和寬敞,必要物品(試管架、吸管、吸取器或吸管盒等)可以暫時放置,其它實驗用品使用完畢后應移出,有利于空氣流通。實驗用品需70%ethanol擦拭后方可帶入無菌操作臺內。實驗操作過程應在臺面的中央無菌區域內完成,請勿在邊緣非無菌區域進行操作。
    3. 小心取用無菌實驗物品,避免細菌污染。請勿觸碰吸管尖頭部和容器瓶口處,也不要在打開的容器正上方進行操作。容器打開后,請用手夾住瓶蓋并輕握瓶身,傾斜大約45°角取用,盡量不要將瓶蓋口朝上放置于桌面。
    4. 工作人員應當首先注意自身安全,必須穿戴齊實驗衣和實驗手套后才能進行實驗。對于病毒感染或是來自人類的細胞株應當特別小心操作,并選擇適當等級的無菌操作臺進行(至少是Class II)。操作過程中,應避免引起aerosol的產生,小心有毒性藥品,例如DMSO和TPA等,并避免針頭的傷害等等。
    5. 定期檢測下列項目:
    5.1. CO2鋼瓶的CO2壓力
    5.2. CO2培養箱的CO2濃度、溫度、和水盤是否有污染(水盤的水需用無菌水,每周定時更換)。
    5.3. 無菌操作臺內的airflow壓力,定期更換紫外線燈管和HEPA過濾膜,預濾網(300小時/預濾網,3000小時/HEPA)。
    6. 水槽內可添加消毒劑(Zephrin 1:750),需定期更換水槽中的水。

     NRK-52E,大鼠腎細胞
    H9c2大鼠心肌細胞(ATCC來源)
    C2C12, 小鼠肌原細胞
    NIH/3T3, 小鼠成纖維細胞系
    大鼠骨髓間充質干細胞(BMSCs)
    HSC-T6, 大鼠肝星狀細胞系
    CHO, 中國倉鼠卵巢細胞系
    COS-7L, 非洲綠猴腎成纖維細胞
    SF9, 昆蟲卵巢細胞
    BRL 3A, 大鼠肝正常細胞
    HK-2, 人腎皮質近曲小管上皮細胞
    HET-1A, 人食管上皮細胞
    RGC-5, 小鼠視網膜神經節細胞
    GC-1, 鼠精原細胞
    293A,人胚腎上皮細胞系(腺病毒包裝級別)
    hDPSCs, 人前磨牙牙髓干細胞
    293T, SV40轉化的人胚腎上皮細胞系
    EPC, 大鼠血管內皮祖細胞
    HBE, 正常人支氣管上皮細胞系
    HL-02 [L-02,HL-7702], 正常人肝上皮細胞
    HUVEC-12, 人臍靜脈血管內皮細胞系
    HUM, 正常人主動脈平滑肌細胞
    HAVSMC, 人主動脈平滑肌細胞
    LX-2, 人肝星形細胞株
    3T3-L1, 小鼠前脂肪細胞

     

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